laboratorio cultivo de células

CULTIVO IN VITRO DE CÉLULAS

INTRODUCCIÓN

En 1967 Singh presento una línea celular obtenida de Aedes alpopictus (C6/36) que ha sido útil para el estudio del virus del dengue por su  alta sensibilidad al virus. Para mantener el cultivo in vitro y regular el crecimiento celular  es necesario nutrirlo con factores de crecimiento como por ejemplo el PDFG derivado de plaquetas y de  una amplia lista de especies celulares dentro de los cuales se presentan fibroblastos, hueso, cartílago,  músculo, y células del tejido conjuntivo.

La vía de señalización en células C6/36  activada por PDFG es a través de la vía RAS/MAPK, que consiste primeramente en la interacción del ligando con los receptores PDGF  que a su vez activan una GTPasa denominada Ras que inicia una cascada de señalización por medio de la fosforilación de residuos de serina y treonina en distintas proteínas como Raf-1 las cual se activa e induce la activación de quinasas las MAPK, esta vía culmina con la fosforilación de ERK que se trasloca al núcleo e induce la transcripción de genes relacionados con la proliferación celular.

EXPERIMENTO

Previo al análisis, se sembraron 150 000 células del mosquito Aedes albopictus (clon) C6/36 en dos tubos de vidrio y se colocaron a crecer por 48 horas, uno de ellos en medio con (10%) y el otro al 2% de suero bovino fetal, èste posee varios factores de crecimiento, por ejemplo PDFG (factor de crecimiento derivado de plaquetas).

Posteriormente se selecciona 2 tubos rotulándolos al 10% y 2%

•   Se adicionò 50 Ul de colorante en cada pozo del soporte.
•   Se desprendió las células golpeteando la base del tubo sobre la palma de la mano varias veces y en el vortex.
• Al resuspender la preparación de células varias veces con la pipeta pasteur se transfirió toda la preparación de células de cada tubo de vidrio al eppendorf.
• Se revisó que correspondiera con el ròtulo; se mezcló bien la preparación de células en el tubo marcado 2%, al transferir 50 uL a un pozo con colorante del soporte, se extrajeron 10 uL y se logró llevar a la cámara de conteo para ser analizada, teniendo en cuenta tres conteos para evaluar la tasa de replicación expresada en porcentaje (proporción de células después de 48 horas de exposición a factores de crecimiento) y la viabilidad celular (porcentaje de células vivas en una muestra del cultivo).

  RESULTADOS

Cultivo con suero 10%

Cultivo con suero 2%

 Tasa de división y viabilidad

DISCUSIÓN RESULTADOS

      En el conteo de cultivos observamos que al colocar a crecer las células del mosquito Aedes alpopictus (C6/36) en un medio con suero bovino fetal al 2%  con factores de crecimiento  derivado de  plaquetas PDFG se encontró una proporción  células vivas un poco mayor que de células muertas,  la viabilidad corresponde aproximadamente a un 55%, la tasa de división después de 48 horas equivale a 444 células. Para una mayor optimización de cultivos para posteriores estudios es de mayor eficacia el suero de bovino fetal al 10%  ya que  encontramos una tasa de crecimiento mayor aproximadamente 872 células obtenidas en 48 horas  y una viabilidad del 88%  consecuente del hallazgo de  un  número mucho mayor de células vivas que de células muertas, como mencionamos anteriormente  estas condiciones son las optimas para prolongar la sobrevivencia y mantenimiento del cultivo cuyo objetivo principal es la propagación de  la línea celular  y  producción de células para la experimentación como es el caso de las células C6 /36  que son de suma importancia para evaluar la funcionalidad  y propagación del virus del dengue para posteriormente encontrar una solución para la enfermedad.